SESIÓN 7

RECUENTO DE SALMONELLA EN PLACA

1-OBJETIVO:

Cultivar salmonella en placa y hacer recuento de la misma.

2-FUNDAMENTO:

El verde brillante: Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella spp., excepto S. typhi y S. paratyphi, a partir de muestras clínicas, alimentos, y otros materiales de importancia sanitaria. No se recomienda para el aislamiento de Shigella spp.

Es de un valor excepcional cuando se investiga un gran número de muestras de heces o alimentos, por su alta capacidad de diferenciación de las colonias sospechosas.

En el medio de cultivo, la pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente de nitrógeno, vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los hidratos de carbono fermentables, el rojo fenol es el indicador de pH, que vira al amarillo cuando hay producción de ácido a partir de la fermentación de azúcares, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el verde brillante actúa como agente selectivo.

3-MATERIAL:

- Medio Verde Brillante

- Asa de siembra de Digralsky

- Placas de petry

- Alcohol

- Mechero bunsen

- Micropipeta de 1ml

- Vasos de precipitado

- Agua destilada

- 4 Tubos de ensayo

- Mechero

- Gradilla

4-PROCEDIMIENTO:

1- Se ponen en 4 tubos 9 ml de agua destilada

2- Después se realizan una serie de diluciones seriadas a 1:10, en las cuales se coge de la muestra un mililitro, después se echa en el primer tubo, del primer tubo una vez mezclado se coge un mililitro y se echa en el segundo, y así hasta el último.

3- Posteriormente, se le introduce un mililitro, de cada tubo en una placa diferente.

4- Se coge el asa de Digralsky y se reparte uniformemente en la superficie del agar, hasta que se agarra y más tarde se le da le vuelta.

5-CÁLCULOS:

264 colonias tubo 1 -> salmonella (Blanquecinas y pequeñas)

1 colonia       tubo 1 -> E. Coli (Grandes, amarillentas)

UFC/ml = nº colonias x Din (x10)* / Din 1ml    -> *Cambia según el tubo del que se halla realizado(x10 tubo 1, x100 tubo 2, x1000 tubo 3, x10000 tubo 4)

Tubo 1 : UFC/ml= 264 x 10/1= 2640 UFC/ml de salmonella

Tubo 2, 3 ,4 no se cuentan porque son menos de 30 (deben contarse cuando hay entre 30 y 300)