1-OBJETIVO:
Contar
las UFC/ml de coliformes totales en 100 ml de muestra, a través de filtración
al vacío, en un medio ENDO.
Comprender y realizar adecuadamente la determinación
de coliformes totales en un medio.
Interpretar los resultados obtenidos, de acuerdo
con las normas aplicables.
2-FUNDAMENTO:
Son bacilos
gramnegativos, aerobios y anaerobios facultativos, no
esporulados. Del grupo <<coliforme>> forman parte varios géneros: Escherichia, Enterobacter,Klebsiella,
Citrobacter, etc. Se encuentran en el intestino del hombre y de los
animales, pero también en otros ambientes: agua, suelo, plantas, cáscara de
huevo, etc.
La mayoría de los coliformes pueden encontrarse en
la flora normal del tracto digestivo del hombre o animales, por lo cual son
expulsados especialmente en las heces, por ejemplo Escherichia coli.
Por esta razón, su presencia constante en la
materia fecal, los coliformes son el grupo más ampliamente utilizado en la
microbiología de alimentos como indicador de prácticas higiénicas inadecuadas.
Como los coliformes también pueden vivir en otros ambientes, se distingue entre
coliformes totales y coliformes fecales. Esta práctica se refiere a coliformes
totales.
El uso de los coliformes como indicador sanitario
puede aplicarse para:
- La detección de prácticas sanitarias deficientes
en el manejo y en la fabricación de los alimentos.
- La evaluación de la calidad microbiológica de un
producto, aunque su presencia no necesariamente implica un riesgo sanitario,
cuando los coliformes son de origen no-fecal.
- Evaluación de la eficiencia de prácticas sanitarias
e higiénicas en el equipo.
- La calidad sanitaria del hielo y los distintos
tipos de agua utilizados en las diferentes áreas del procesamiento de
alimentos.
Los coliformes resisten la presencia de bilis en el
medio de cultivo; cuando se desarrollan en ABRV, el ácido producido por la
fermentación de la lactosa, ocasiona el vire del indicador rojo neutro y la
precipitación de las sales biliares por lo que las colonias son color rojo
oscuro y generalmente están rodeadas de un halo de sales biliares precipitadas,
de color rojo claro o rosa. La posibilidad de contar las colonias se fundamenta
en su dispersión y separación.
3-MATERIAL:
● Vaso de
precipitado x2 (agua muestra, alcohol)
● Embudo
● Probeta
100 ml
● Pipeta
Pasteur
● Matraz
Kitasato
● Alcohol
● Placa
Petri estéril
● Pinzas
● Mechero
Bunsen
● Mechero
● Filtro
reticulado
4-PROCEDIMIENTO:
Cogemos
100 ml de agua de muestra, vertimos y enrasamos en la probeta con la pipeta
Pasteur.
Ahora
filtramos al vacío el agua de muestra.
(Preparación
para la filtración al vacío con el Kitasato): Preparamos la bomba de vacío,
matraz Kitasato y mechero Bunsen (mismo procedimiento para las filtraciones).
Echamos un poco de alcohol en un vaso de precipitado, agua destilada estéril en
una placa Petri estéril y encendemos el mechero. Mojamos las pinzas en alcohol
y flameamos rápidamente en el mechero Bunsen. Tomamos el filtro y lo metemos en
agua destilada estéril, retirando el papel de filtro reticulado y colocándolo
sobre el matraz. Flameamos las pinzas de nuevo y procedemos a verter la mezcla
sobre el embudo del matraz y encendemos la bomba de vacío. Una vez filtrado,
volvemos a flamear las pinzas y tomamos el filtro reticulado, colocándolo, con
cuidado de no dejar burbujas, sobre el medio ENDO
Ponemos fecha y nombre de práctica
en la placa para identificarla, y metemos en el horno a 40ºC
5-RESULTADO:
En este caso hemos contado menos de 30UFC por lo que no sería un resultado representativo de la muestra.
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